石楠葉有祛風、通絡、益腎之功效。其中的兩種有效成分齊墩果酸和熊果酸在抗炎、保肝、止疼、強心等許多療效方面已被現(xiàn)代科學證實。目前石楠葉中熊果酸的測定方法有薄層色譜法。本實驗采用毛細管電泳法測得了石楠葉中齊墩果酸和熊果酸異構體的含量
1 實驗部分
儀器與藥品:美國Waters Quanta 4000E毛細管電泳儀。毛細管(河北永年光導纖維廠,直徑75μm)總長60cm,有效長度52cm。數據處理由Waters Millennium 2010色譜管理軟件完成。Na2HPO4,Na2B4O7,SDS,95%乙醇均為分析純。齊墩果酸和熊果酸標準品購自中國藥品生物制品檢定所。石楠葉購于河北保定市藥材公司。水為雙蒸餾水。
2 方法與結果
2.1 實驗方法:實驗前,毛細管依次用0.1mol/L鉻酸、重蒸餾水、0.1mol/L KOH、重蒸餾水各沖洗5min,然后再用緩沖溶液沖洗4min。在每兩次運行之間,毛細管僅用緩沖溶液沖洗4min。3次運行后,毛細管需用上面方法清洗一回。運行電壓為16kV,214nm 紫外檢測,重力進樣時間為5s,實驗溫度是26℃。實驗前緩沖溶液用微濾膜過濾。
2.2 優(yōu)化的實驗條件:綜臺考察緩沖溶液組份濃度,SDS濃度及有機溶劑(乙醇)含量對齊墩果酸和熊果酸標準混合物分離的影響。確定了*的緩沖溶液體系為15mmo|/L Na2HPO4、15mmol/Lna2B4O7、10mmol/L SDS、5 %乙醇的電解質溶液。在此條件下,齊墩果酸和熊果酸譜峰能*分開,分離度達到0.98。
2.3 標準曲線的繪制:稱取適量的齊墩果酸和熊果酸對照品,分別溶于一定量乙醇中得標準溶液以此標準溶液為基礎再配成不同濃度的標準品溶液,在*分離條件下進行測定。以譜圖中峰面積校正值為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。兩種物質的線性回歸方程(校正峰面積mV/s,濃度g/mL)和相關系數(r)及線性范圍為:
齊墩果酸Y=一28.5+13.4×10000(r=0.997)線性范圍為0.53~3.56mg/mL。
熊果酸Y=一14.8+16.9×10000X(r=0.996)線性范圍為0.57~4.12mg/mL。
2.4 樣品測定:稱取3.94 g石楠葉碎塊,放人索氏提取器中,用80mL 95%乙醇提取1、5h,將提取液濃縮并定容至50mL得樣品溶液。在*分離條件下運行樣品溶液,測得石楠葉中齊墩果酸含量(g/g)為2.79%,RSD=2.67%(n=5);熊果酸含量(g/g)為7.98%,RSD=2.44%(n=5)。
2.5 回收率測定:加樣回收率測定結果,齊墩果酸為102%,RSD=2.85% ( =4);熊果酸為104%,RSD= 3.21% (n=4)。
3 討論
毛細管電泳法測定石楠葉中齊墩果酸和熊果酸的含量具有快速、準確、微量優(yōu)點。其中齊墩果酸含量為給出。此法測得的熊果酸含量高于其它方法測定值,說明用乙醇提取效率好于甲醇。本文提供了評價石楠葉藥材及相關藥物質量的一種可靠分析手段。
參考文獻:
[1] 江蘇新醫(yī)學院縮.中藥大辭典[M].上冊.上海:上海科學技術出版社,1997