摘要：目的：測(cè)定保肝顆粒中大黃素的含量，制訂該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：樣品水解后，提取大黃素，制備供試品溶液，用TLCS法定樣品中大黃素的含量。結(jié)果：測(cè)得三批樣品中大黃素的含量范圍為43.40～45.04mg／袋，加樣回收率為98.72%，變異系數(shù)為1.15%。結(jié)論：方法準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)?？勺鳛樵撝苿┑馁|(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。
    關(guān)鍵詞：保肝顆粒； 虎杖； 大黃素； 含量測(cè)定； 薄層掃描法
    保肝顆粒是正在研制的中藥6類新藥，具有清熱保肝之功效．本品由虎杖，柴胡等ll味中藥組成．虎杖是本方劑的君藥，其所含大黃素及其苷類又是清熱保肝的主要有效成分。為探討本制劑的內(nèi)在質(zhì)量，制定質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，參照大黃素含量測(cè)定的有關(guān)文獻(xiàn)，本文對(duì)保肝顆粒中的大黃素進(jìn)行了含量測(cè)定方法的研究。通過方法學(xué)的系統(tǒng)考察和三批樣品的含量測(cè)定，建立了本制劑中大黃素的含量測(cè)定方法，現(xiàn)報(bào)告如下。
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    1．1 儀器與試劑CS-9301型薄層掃描儀（日本島津公司）。定量毛細(xì)管（美國(guó)Drummond公司），薄層鋪板儀（重慶新力試驗(yàn)電器廠），硅膠G（青島海洋化工廠），石油醚（3O一6O℃）、鹽酸、冰醋酸、氯仿等所用試劑均為分析純；大黃素對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用，批號(hào)為756—9204。
    1．2 樣品來源及處理 三批保肝顆粒樣品均由本課題組研制，其批號(hào)分別為20010305，20010317，20010326；虎杖及制劑所用藥材均購(gòu)于濟(jì)南市建聯(lián)藥材供應(yīng)站，經(jīng)鑒定虎杖為蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb．et Zucc．的干燥根莖和根，適當(dāng)粉碎后備用。
    2 實(shí)驗(yàn)方法
    2．1 樣品溶液的制備
    2．1．1 水解時(shí)聞的確定 稱取本品粉末約lg，精密稱定，共稱取3份。加蒸餾水5Oml，滴加鹽酸5ml，混勻，加入氯仿5Oml，分別水浴水解1，2，3 h，按以下供試品溶液的試驗(yàn)方法操作。制備各不同水解時(shí)間的樣品液，并均定容至1Oml容量瓶中，吸取相同體積的各樣品液點(diǎn)樣測(cè)定，發(fā)現(xiàn)水解1h的樣品中大黃素的測(cè)定值偏低，而水解2h和3h樣品的測(cè)定值基本相同，表明樣品水解2h即可水解*，故水解時(shí)間確定為2h。
    2．1．2 供試品溶液的制備 稱取本品粉末約1g，精密稱定，共稱取3份。加蒸餾水5O ml，滴加鹽酸5 ml，再加入氯仿5Oml，水浴回流水解2h，吸出氯仿液，再加入氯仿（50，30ml）同上回流兩次，0.5h／次，吸出氯仿液，合并3次氯仿液，以5Oml水洗滌1次，棄去水液，回收氯仿至盡，殘?jiān)詿o(wú)水乙醇定容至1Oml備用。
    2．1. 3 虎杖藥材液的制備 稱取虎杖藥材粉末約0.5 g，精密稱定，按樣品的制備工藝及供試品液的制備方法操作，制成1Oml虎杖藥材溶液，備用。
    2．1．4 大黃素對(duì)照液的制備 稱取大黃素對(duì)照品適量，以甲醇制成每1ml含大黃素0.2mg的溶液。
    2．1．5 缺虎杖空白液的制備 按處方比例，準(zhǔn)確稱取除虎杖外的其它各藥材，模擬本品的制備工藝和供試品液的制備方法制成缺虎杖空白液。
    2．2 薄層色譜條件的選擇
層析板：0.3%CMC 硅膠G板20cm×20cm×0.4mm。105℃活化30min，置干燥器內(nèi)備用。
展開劑：石油醚（3O～60℃）-醋酸乙酯-冰醋酸（15：1.5；1，V／V ）。
斑點(diǎn)觀察：自然光下檢視為黃色斑點(diǎn)。
    經(jīng)多種色譜條件的篩選發(fā)現(xiàn)，樣品在上述薄層條件下能得到很好的分離，大黃素斑點(diǎn)前后分離*，無(wú)明顯干擾。大黃素Rf值較適中（Rf=0.50），而缺虎杖空白液在與大黃素對(duì)應(yīng)的位置上則無(wú)對(duì)應(yīng)的斑點(diǎn)。
    2．3 樣品的含量測(cè)定
    2．3．1 測(cè)定條件采用雙波長(zhǎng)鋸齒掃描，測(cè)定波長(zhǎng)λs=455nm參比波長(zhǎng)λR=600nm，狹縫0.4 mm×0.4 mm，線性化參數(shù)Sx=3，外標(biāo)兩點(diǎn)法測(cè)定。
    2．3．2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇對(duì)供試品及大黃素經(jīng)層析后于37O～600nm下進(jìn)行掃描測(cè)定，畫出zui大吸收曲線圖，測(cè)得zui大吸收波長(zhǎng)為455nm。
    2．3．3 空白干擾試驗(yàn)分別取供試液2μl，大黃素對(duì)照品溶液3μl，缺虎杖空白溶液2μl，點(diǎn)于同一薄層板上．依法展開，取出，在455nm下檢測(cè)，結(jié)果缺虎杖空白溶液在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上沒有吸收峰出現(xiàn)，這表明本測(cè)定元明顯干擾。
    2．3．4 線性關(guān)系考察準(zhǔn)確吸取大黃素對(duì)照液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0μl點(diǎn)于同一薄層板上，按選定的色譜條件展開后進(jìn)行掃描測(cè)定，以點(diǎn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析得回歸方程；y=2938.9x+563.84，相關(guān)系數(shù)r=0.999。
    2．3．5 精密度試驗(yàn)
    2．3．5．1 同板精密度試驗(yàn)
    準(zhǔn)確吸取同一批供試品液2μl，對(duì)照品溶液3μl。于同一薄層板上點(diǎn)5個(gè)相同量的點(diǎn)，依法測(cè)定峰面積積分值。
    2．3．5．2 異板精密度試驗(yàn)準(zhǔn)確吸取同一批供試品液2μl，對(duì)照品溶液3μl，分別點(diǎn)于5塊薄層板上，每板點(diǎn)5個(gè)相同量的點(diǎn)，依法測(cè)定各板大黃素的含量并計(jì)算精密度。
    2．3．6 斑點(diǎn)穗定性試驗(yàn)將層析后的供試品及對(duì)照品分別測(cè)定峰面積積分值，每隔20min測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定7次。結(jié)果表明，大黃素在測(cè)定時(shí)間2 h內(nèi)斑點(diǎn)顏色比較穩(wěn)定，峰面積積分值基本不變。
    2．3．7 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品約1.0 g，精密稱定，共稱取6份，依法制備各供試品溶液，并按以上方法點(diǎn)樣測(cè)定，計(jì)算各樣品中大黃素的含量。
    2．3．8 回收率實(shí)驗(yàn)稱取保肝顆粒粉末約0.5g，精密稱定，共取5份，各加人大黃素對(duì)照品2.26mg，按供試品液的制備項(xiàng)下制備各回收率試驗(yàn)液，依法測(cè)定各試驗(yàn)液中的大黃素。
    2．3，9 樣品的測(cè)定分別準(zhǔn)確吸取三批供試品液各2μl和虎杖藥材液1μl，各點(diǎn)于一塊薄層板上，依法測(cè)定各批保肝顆粒和虎杖樣品中大黃素的含量。
    3 小結(jié)
    3．1 測(cè)得三批保肝顆粒中大黃素的含量分別為45.04mg／袋，43.40 mg／袋，44.48 mg／袋，加樣回收率為98.7l％ ，變異系數(shù)RSD為1.15%。
    3．2 試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)點(diǎn)樣量，薄層板厚度，層析溫度對(duì)樣品中大黃素的分離都有較大影響。通過對(duì)上述三種條件的篩選發(fā)現(xiàn)，點(diǎn)樣量大于1.6μg，層析板厚度小于0.4mm，溫度高于3O℃時(shí)，都易產(chǎn)生不同程度的拖尾。
    3．3 本實(shí)驗(yàn)中供試品采用的水解條件（酸的種類及濃度）是參照《中國(guó)藥典）2000年版一部虎杖項(xiàng)下的水解條件確定的。
    3．4 本實(shí)驗(yàn)采用CHCl3提取液回收后直接點(diǎn)樣測(cè)定，方法簡(jiǎn)便，靈敏度高，重現(xiàn)性好，是控制本品內(nèi)在質(zhì)量的較理想方法。
參考文獻(xiàn)：
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