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| 楊曉薇 （北京天壇生物制品股份有限公司計(jì)量室，北京100024） 概述：區(qū)帶離心技術(shù)目前在生物制藥和農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用越來越廣泛．區(qū)帶轉(zhuǎn)頭是在水平轉(zhuǎn)頭技術(shù)基礎(chǔ)上進(jìn)一步提高．它是根據(jù)樣品溶液的密度梯度將細(xì)胞、病毒和微粒進(jìn)行分離收集的．區(qū)帶離心的加樣和下樣及樣品的收集過程均在轉(zhuǎn)頭旋轉(zhuǎn)的條件下連續(xù)進(jìn)行的。其特點(diǎn)是容量大并具有較高的穩(wěn)定性和可靠性．因此在試驗(yàn)室研究工作中也廣泛應(yīng)用 下面就將日立區(qū)帶轉(zhuǎn)頭fP35ZT）在使用中需注意的問題簡單分析如下： 1 操作過程中應(yīng)注意的問題 1．1 樣品溫度和轉(zhuǎn)頭溫度的設(shè)置 要把離心用的轉(zhuǎn)頭溫度與將需加入的樣品—— 密度梯度溶液的溫度設(shè)置盡可能一致（若溶液溫度較低，可將轉(zhuǎn)頭預(yù)先冷卻）．若溫度設(shè)置溫差太大，可能會發(fā)生以下問題 1．1．1 當(dāng)加入的樣品溫度低于運(yùn)行的轉(zhuǎn)頭溫度時(shí)：會引起加入的樣品溶液溫度升高、體積膨脹．以至轉(zhuǎn)頭內(nèi)的壓力升高．造成離心后裝配帽的中心鈕按不下去，帽無法取下 下表列出使用P35ZT轉(zhuǎn)頭加入水后溫度升高體積變化的量： 因此．出現(xiàn)上述問題時(shí)．要在離心轉(zhuǎn)速保持在3000rpm時(shí)（2000～3000rpm間任意設(shè)定），將轉(zhuǎn)頭溫度降至與加入的樣品溫度一致時(shí)．嘗試取下帽．若還不能取下，待機(jī)器停轉(zhuǎn)后，用力向下按帽中心鈕，將帽取下。  1．1．2 當(dāng)加入的樣品溫度高于運(yùn)行的轉(zhuǎn)頭溫度時(shí)：會引起加入的樣品溫度降低．體積減小和轉(zhuǎn)頭內(nèi)的壓力變?yōu)樨?fù)壓．造成離心后裝配帽和中心鈕被轉(zhuǎn)頭軸吸?。睙o法取下溫度降低．體積收縮的量與上表一中體積膨脹的量相同出現(xiàn)此種情況后．要在離心機(jī)3000rpm運(yùn)轉(zhuǎn)條件下取下帽，若無法取下．就要在3000rpm運(yùn)行狀態(tài)下，將轉(zhuǎn)頭溫度升高至加入的溶液溫度．再嘗試將帽取下。 1．2 加樣和下樣過程中應(yīng)注意的問題：  1．2．1 加樣和下樣過程中．轉(zhuǎn)頭內(nèi)不得有氣泡產(chǎn)生．因此在加樣和下樣過程中均要進(jìn)行消泡處理。 A．加樣時(shí)．管子的連接如圖二所示．一定要使消泡裝置安裝在加樣頭之前且要將管子夾緊．直至加樣頭連接沒有氣泡排出后．方可取下加樣頭，若轉(zhuǎn)頭內(nèi)有氣泡存在．會使紅墊圈承受異常壓力。造成溶液的泄露．影響分離物質(zhì)的密度梯度和樣品的收集．致使離心工作失敗。  B．下樣離心后．安裝上加樣頭來進(jìn)行下樣時(shí)．下樣過程的管子連接如圖三所示。消泡裝置須在外側(cè)．要保證在加樣頭上消泡管上有一空氣緩沖區(qū)．用來吸收下樣過程中由于樣品的流動產(chǎn)生的氣泡．消泡管的空氣緩沖區(qū)的高度在10cm以上。  1．2．2 加樣品溶液時(shí)的壓力控制： 高濃度的溶液．加樣速度要控制得慢一些．也可安裝一壓力指示計(jì)進(jìn)行監(jiān)測．加樣壓力應(yīng)在1kg／cm2以下。 1．2．3 加樣頭安裝時(shí)要注意的問題： A．為防止紅墊圈異常損耗和容易取下裝配帽．要在每次安裝加樣頭之前．用薄紙沾點(diǎn)兒水輕輕擦拭紅墊圈表面。 B．保證紅墊圈安裝的位置在視覺上是水平的且處于中心處．在安裝加樣頭時(shí)動作要快．將加樣頭垂直安裝在紅墊圈表面．要格外小心不要碰到紅墊圈表面。加樣頭安裝位置正且到位，不然會損傷紅墊圈表面。 2 防止樣品泄露和加樣頭震動的預(yù)防措施 2．1 防護(hù)板 要保證防護(hù)板安裝時(shí)的水平．還要保證離心機(jī)驅(qū)動軸是水平的．這可通過調(diào)節(jié)離心機(jī)的水平調(diào)節(jié)螺栓（離心機(jī)底部）來進(jìn)行調(diào)整。防護(hù)板要牢固地固定在用于支撐的三個(gè)點(diǎn)上．且要鎖緊螺柄．并且要保證與轉(zhuǎn)頭之間的高度在35—36ram之間。（這可根據(jù)其規(guī)定的高度）順時(shí)針或逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)墊圈來調(diào)整．調(diào)整后一定要擰緊上面的三個(gè)螺絲 2．2 加樣頭 加樣頭中安裝了四根管子．兩根高一點(diǎn)的管子用來加溶液和樣品的．兩根矮一點(diǎn)的管子是用來接冷水進(jìn)行冷卻轉(zhuǎn)頭的。其內(nèi)部的軸承轉(zhuǎn)動時(shí)要平滑．若軸承的轉(zhuǎn)動與轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速不同步時(shí)．轉(zhuǎn)頭軸上部的兩個(gè)O型圈在很短的時(shí)間內(nèi)就容易損壞。因此。當(dāng)加樣頭有較大振動和噪音時(shí)．就要判斷是否軸承損壞或軸承粘上樣品造成軸承運(yùn)轉(zhuǎn)異常（軸承損壞需更換。軸承臟需清潔）．以及加樣頭內(nèi)的彈簧拆下、拉長、彈簧的長度應(yīng)在30—35mm或者將防護(hù)板的高度是否規(guī)定符合要求（35—36mm）。 2．3 轉(zhuǎn)頭 2．3．1 紅墊圈（大多數(shù)的問題均出在紅墊圈上）的檢查及正確安裝 首先檢查紅墊圈的表面是否有劃傷或凹痕 若紅墊圈表面有異常磨損．可導(dǎo)致加入的具有滲透力的樣品溶液泄漏．因此在安裝紅墊圈時(shí)要非常小心．要用手指肚向下按，千萬不可用指尖（指甲極易損傷紅墊圈）。紅墊圈使用一段時(shí)間后會出現(xiàn)輕微劃傷．此時(shí)可用800目以上鏡向砂紙或在轉(zhuǎn)頭蓋（光滑平且硬的平面）上輕輕打磨，這需要有一定的技巧的。特別需注意．修復(fù)的紅墊圈表面不要留有打磨時(shí)的殘留物 其次紅墊圈的安裝也非常重要 紅墊圈的周邊和底部要安裝兩個(gè)O型圈．兩個(gè)O型圈安裝前要涂抹少量的真空脂．紅墊圈往軸上安裝時(shí)要用點(diǎn)力向下按．安裝的位置要深一些且盡量水平不能裝歪。 2．3．2 轉(zhuǎn)軸上部的兩個(gè)O型圈的檢查 取下此兩個(gè)O型圈。如圖四所示．用手輕輕拉緊O型圈．看其是否出現(xiàn)裂紋和其磨損程度。若磨損嚴(yán)重或老化出現(xiàn)裂紋．及時(shí)更換此兩個(gè)O型圈。 2.3．3 限位器和軸上其他O型圈的檢查  限位器的作用是為防止帽的脫落，每6～12個(gè)月要更換一個(gè)新的限位器。將軸插入隔板之前要在0型圈和軸上涂抹少量的箕空脂，同時(shí)插入時(shí)不要過分用力，避免O型圈損傷或斷裂。 2．3．4 檢查隔板上樣品通過的路徑是否被堵塞 使用后，隔板洗潔效果不*時(shí)，有可能會造成樣品流經(jīng)的部分路徑堵塞，因此，每次使用完畢，須將隔板仔細(xì)沖洗干凈。還有若將加樣頭裝在轉(zhuǎn)頭上，沒有加入溶液并長時(shí)間旋轉(zhuǎn)．會造成加樣頭發(fā)熱和紅墊圈異常磨損，及加樣頭產(chǎn)生振動噪音．因此，裝上加樣頭旋轉(zhuǎn)三分鐘以上沒有加入溶液時(shí)．要馬上取下加樣頭散熱并要冷卻后再次使用。 4 裝配帽和其他部件的檢查 還要檢查裝配帽按鈕上下活動是否靈活．轉(zhuǎn)頭密封圈是否老化．密封圈的安裝是否正確且在轉(zhuǎn)頭的螺紋處要涂潤滑脂，轉(zhuǎn)頭蓋是否旋緊（到位）等。特別應(yīng)注意的是轉(zhuǎn)頭上安裝了密封圈后不要倒著放置來進(jìn)行儲放和晾干．因?yàn)樘热舴胖帽砻娌黄綍r(shí)，極易使密封圈變形。 |
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