如何判斷ELISA實驗是否成功?

來源：天津天正信達(dá)生物科技有限公司 2025年11月05日 08:46

　　如何判斷ELISA實驗是否成功?

　　ELISA實驗成功的判斷需結(jié)合‌陰性/陽性對照有效性‌、‌標(biāo)準(zhǔn)曲線質(zhì)量‌及‌樣本結(jié)果可靠性‌，具體標(biāo)準(zhǔn)如下：

　　1. 對照有效性驗證‌

　　陰性對照‌：OD值應(yīng)接近空白孔(通常≤0.1)，且無假陽性信號‌。

　　陽性對照‌：OD值需顯著高于Cut-off值(如P/N比值≥2)，證明試劑活性正常‌。

　　Cut-off值判定‌：樣本OD值≥陰性對照均值+2~3SD(或按試劑說明書閾值)判為陽性‌。

　　2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線質(zhì)量‌

　　線性范圍‌：R²≥0.99，且樣本OD值落在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性區(qū)間內(nèi)。

　　梯度合理性‌：標(biāo)準(zhǔn)品OD值應(yīng)隨濃度遞增呈規(guī)律性變化，無跳孔或異常波動‌。

　　3. 樣本結(jié)果可靠性‌

　　重復(fù)性‌：同一樣本重復(fù)孔間OD值差異應(yīng)<20%‌。

　　信號強度‌：樣本OD值需顯著高于陰性對照(競爭法則相反)，若信號過弱需復(fù)測或調(diào)整樣本濃度‌。

　　4. 常見失敗原因‌

　　假陽性/陰性‌：洗滌不凈、封閉不足或抗體交叉反應(yīng)‌。

　　曲線異常‌：標(biāo)準(zhǔn)品失效、孵育時間不足或酶標(biāo)板污染‌。

　　5. 結(jié)果表示方法‌

　　定性‌：陰陽性判定(如OD值>Cut-off值)‌。

　　定量‌：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度，需標(biāo)注稀釋倍數(shù)。

　　若需進(jìn)一步優(yōu)化實驗，可參考：ELISA實驗操作視頻。

　　注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

　　天津天正信達(dá)供應(yīng)：RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑盒、提取試劑盒、色譜進(jìn)樣瓶、培養(yǎng)基瓶、試劑瓶、胎牛血清、染色液、試劑瓶、QPCR試劑盒、生物試劑、抗體、瓊脂糖、實驗耗材，我司擁有一支覆蓋生物化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等專業(yè)人員的研發(fā)、構(gòu)建了儀器設(shè)備齊全的實驗技術(shù)平臺，主要包括AKTA、高壓均質(zhì)機(jī)、全波長酶標(biāo)儀、高速落地離心機(jī)和qPCR儀等大型儀器設(shè)備。

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