ELISA樣本值低于空白值的原因分析
ELISA樣本值低于空白值可能由以下原因?qū)е拢?/p>
一、實驗操作誤差
隨機誤差?
由不可控因素(如溫度波動、儀器靈敏度差異)引起,表現(xiàn)為測量值隨機分布。可通過增加空白孔重復(fù)數(shù)(建議≥10次)或提高操作技能降低影響?。
過失誤差?
操作失誤導(dǎo)致,如空白孔被HRP污染、洗滌不凈或加樣錯誤。需嚴格規(guī)范操作流程,避免交叉污染?。
二、樣本與試劑問題
基質(zhì)效應(yīng)?
樣本中非目標成分干擾抗原-抗體結(jié)合,導(dǎo)致信號抑制??赏ㄟ^稀釋樣本或建立校正曲線緩解。
鉤狀效應(yīng)?
樣本中目標物濃度過高時,未正確稀釋導(dǎo)致假陰性。建議預(yù)實驗確定稀釋倍數(shù)?。
試劑保存不當?
試劑盒未按說明書保存(如反復(fù)凍融、溫度超標)會導(dǎo)致活性降低。需分裝凍存標準品,避免反復(fù)凍融?。
三、設(shè)備與操作規(guī)范
移液器故障?
漏氣、未校準或吸頭不匹配會導(dǎo)致加樣量不準。需定期校準移液器,使用配套吸頭?。
孵育條件異常?
溫度不穩(wěn)定或時間不足影響反應(yīng)效率。應(yīng)使用校準的恒溫箱,確保孵育時間充分?。
解決方案總結(jié)?:
優(yōu)先排除操作失誤(如重復(fù)實驗、規(guī)范洗滌)
檢查試劑保存狀態(tài)及移液器精度
對高濃度樣本進行梯度稀釋,或選用高靈敏度試劑盒?
注意:以上僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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