使用點成LUNA-FX7™自動細胞計數(shù)儀進行體細胞計數(shù)

1 簡介

體細胞計數(shù)（SCC）是乳品行業(yè)用于管理乳房健康的一個成熟參數(shù)。體細胞計數(shù)的增加表明存在乳房內(nèi)感染（IMI），進而引發(fā)乳腺炎。這種情況可能導(dǎo)致受孕率低下并影響牛奶產(chǎn)量。因此奶牛場會使用基于流式細胞術(shù)的細胞計數(shù)儀，如 FossoMatic。盡管這種方法對于高通量分析很有效，但在研究領(lǐng)域中仍需要一種成本較低的方法來計數(shù)小樣本量的細胞。

由于牛奶中存在脂肪和蛋白質(zhì)碎片，對牛奶中的體細胞計數(shù)頗具挑戰(zhàn)性。為了解決這個問題，已開發(fā)出體細胞染色液，以便與點成 LUNA-FX7™ 配合，進行簡單直接的體細胞計數(shù)。在本文中，我們展示了點成 LUNA-FX7™ 自動細胞計數(shù)儀使用體細胞染色液高效計數(shù)牛奶中體細胞的能力。

2 材料與方法

從 POSTBIO 公司獲取了高、中、低濃度的生鮮牛奶樣本。只有低濃度樣本的體細胞計數(shù)低于每毫升 2×10?個細胞。將每個牛奶樣本與體細胞染色液（產(chǎn)品編號 F23101）按 1:4 的比例混合。使用點成 LUNA-FX7™ 搭配單通道載玻片（產(chǎn)品編號 L72011）進行細胞計數(shù)。在熒光細胞計數(shù)模式下采用了經(jīng)過修改的參數(shù)配置（表 1）。

3 染色原理

由于牛奶中的脂肪和蛋白質(zhì)碎片，在明場（BF）通道中進行體細胞計數(shù)效果不佳（圖 1A），因為牛奶中的這些碎片在點成 LUNA-FX7™ 可檢測的波長下幾乎沒有熒光信號，所以使用含有碘化丙啶（PI）的體細胞染色液來進行體細胞計數(shù)。該染色液還含有一種去污劑，可誘導(dǎo)細胞裂解，碘化丙啶無法穿透完整的細胞。一旦細胞被通透，碘化丙啶就會通過插入堿基對之間與 DNA 結(jié)合，結(jié)合后其熒光強度會增加 20 至 30 倍。這使得能夠準確區(qū)分牛奶中的體細胞和碎片。因此在進行體細胞計數(shù)時不會受到牛奶中碎片的干擾。

4 結(jié)果

對點成 LUNA-FX7™ 的結(jié)果進行了仔細分析和檢查，以確認碘化丙啶標記和識別的體細胞是否準確。從標記圖像中可以看出，點成LUNA-FX7™ 成功區(qū)分了牛奶中的體細胞和碎片（圖 1A）。此外，將點成 LUNA-FX7™ 的體細胞計數(shù)結(jié)果與基于流式細胞術(shù)的細胞計數(shù)儀的已知濃度進行了比較。結(jié)果顯示，兩種不同平臺的結(jié)果之間具有很強的相關(guān)性（低濃度樣本低于每毫升 2×10?個細胞）（圖 1B）。

表 1.點成 LUNA-FX7™ 熒光細胞計數(shù)模式下體細胞計數(shù)的優(yōu)化參數(shù)設(shè)置

圖 1. （A）該圖像顯示了使用點成 LUNA-FX7™ 成功染色并標記的牛奶樣本中的體細胞。

（B）柱狀圖顯示了點成 LUNA-FX7™ 和基于流式細胞術(shù)的細胞計數(shù)儀所獲得的體細胞計數(shù)數(shù)據(jù)之間具有很強的相關(guān)性。

5 結(jié)論

本文證明了點成 LUNA-FX7™ 自動細胞計數(shù)儀能夠使用體細胞染色液有效地對體細胞進行計數(shù)。同時點成LUNA-FX7™ 和基于流式細胞術(shù)的細胞計數(shù)儀的體細胞計數(shù)結(jié)果比較顯示，二者之間具有很強的相關(guān)性。因此，點成LUNA-FX7™ 自動細胞計數(shù)儀功能多樣，可用于包括體細胞計數(shù)在內(nèi)的多種應(yīng)用。

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