ELISA實驗中常見問題有哪些?

　　ELISA實驗中常見的問題主要集中在信號異常、重復性差和靈敏度不足這幾個方面，天正信達來幫你梳理一下核心問題和應對方法：

　　一、信號異常問題

　　高背景或非特異性染色?

　　原因?：洗滌不充分、試劑污染、抗體濃度過高或孵育時間過長。

　　解決?：增加洗滌次數(shù)和力度，優(yōu)化抗體濃度，嚴格控制孵育時間。

　　所有孔均無顏色?

　　原因?：漏加關鍵試劑(如酶標物、顯色劑)、試劑失活或嚴重污染。

　　解決?：仔細檢查試劑添加順序，使用新鮮試劑，確保操作環(huán)境清潔。

　　陽性對照不顯色/顯色淺?

　　原因?：陽性對照孔漏加試劑、試劑活性下降或孵育條件不當。

　　解決?：檢查陽性對照設置，使用新鮮有效試劑，優(yōu)化孵育溫度和時間。

　　二、重復性問題

　　重復孔間差異大?

　　原因?：加樣不準確、移液器未校準、洗板不均或溫育條件波動。

　　解決?：使用校準移液器，規(guī)范洗板操作，確保溫育環(huán)境穩(wěn)定。

　　整板OD值偏低?

　　原因?：孵育時間不足、溫度偏低或未加終止液。

　　解決?：延長孵育時間，確保溫度準確(通常37℃)，及時加入終止液。

　　三、靈敏度問題

　　靈敏度低/信號弱?

　　原因?：試劑活性下降、顯色時間不足或底物失效。

　　解決?：使用新鮮試劑，優(yōu)化顯色時間，避光保存底物。

　　標準曲線不佳?

　　原因?：標準品配制錯誤、試劑保存不當或酶標儀設置錯誤。

　　解決?：嚴格按照說明書配制標準品，規(guī)范試劑保存，校準酶標儀。

　　四、其他常見問題

　　假陽性/假陰性?：由器具污染、樣本內(nèi)源性干擾或終止液問題引起。

　　樣本無信號?：可能因靶標濃度過低、存在抑制劑或Hook效應導致。

　　注：以上僅供參考，本試劑僅供科研使用，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。

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