植物1,5-二磷酸核酮糖羧化酶(RuBisCO)ELISA檢測(cè)試劑盒技術(shù)說(shuō)明書(shū)

　　BS-4938 植物1,5-二磷酸核酮糖羧化酶(RuBisCO)ELISA試劑盒 96T/48T

　　產(chǎn)品概述

　　本試劑盒用于體外定量檢測(cè)植物組織、細(xì)胞及相關(guān)液體樣本中核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(RuBisCO)的活性。該酶是植物光合作用Calvin循環(huán)的關(guān)鍵酶，其活性直接影響光合速率和光呼吸過(guò)程。本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，具有高靈敏度和特異性。

　　檢測(cè)原理

　　試劑盒采用雙抗體一步夾心法：

　　預(yù)包被抗RuBisCO單抗的微孔板捕獲樣本中的目標(biāo)酶

　　加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體形成"抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物

　　經(jīng)凈洗滌后，加入TMB顯色底物

　　反應(yīng)終止后，酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD值)

　　樣品中RuBisCO濃度與OD值呈正相關(guān)

　　試劑盒組成

　　組分 規(guī)格 保存條件

　　預(yù)包被微孔板 12×8孔 4℃

　　標(biāo)準(zhǔn)品(6個(gè)濃度梯度) 0.3mL×6管 -20℃

　　酶標(biāo)抗體 15mL 4℃

　　20×洗滌緩沖液 50mL 室溫

　　TMB顯色液A/B 各15mL 4℃避光

　　終止液 15mL 室溫

　　樣本稀釋液 30mL 4℃

　　樣本處理

　　組織樣本

　　稱取0.1g組織，加入1mL提取液冰浴勻漿

　　10,000g 4℃離心10分鐘

　　取上清液立即檢測(cè)或-80℃保存(避免反復(fù)凍融)

　　細(xì)胞樣本

　　收集細(xì)胞沉淀，加入提取液裂解

　　10,000g 4℃離心10分鐘

　　取上清液檢測(cè)

　　血清/液體樣本

　　室溫靜置2小時(shí)或4℃過(guò)夜

　　1,000g離心20分鐘

　　取上清液檢測(cè)

　　注意事項(xiàng)?：

　　避免樣本溶血

　　NaN3會(huì)抑制HRP活性

　　新鮮樣本優(yōu)先，凍存樣本避免反復(fù)凍融

　　操作步驟

　　準(zhǔn)備試劑?：所有試劑使用前平衡至室溫(20-25℃)

　　加樣?：

　　標(biāo)準(zhǔn)品孔：50μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品

　　樣本孔：50μL待測(cè)樣本

　　空白孔：不加

　　溫育?：每孔加入100μL酶標(biāo)抗體，37℃避光反應(yīng)60分鐘

　　洗滌?：每孔加350μL洗滌液，靜置1分鐘后甩干，重復(fù)5次

　　顯色?：每孔加入50μL底物A和B，37℃避光反應(yīng)15分鐘

　　終止?：每孔加入50μL終止液

　　測(cè)定?：15分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm OD值

　　結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　根據(jù)樣本OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得濃度

　　樣本濃度=測(cè)得濃度×稀釋倍數(shù)(如有)

　　性能指標(biāo)

　　檢測(cè)范圍：18-650 U/L

　　靈敏度：≤5 U/L

　　批內(nèi)變異系數(shù)：<10%

　　批間變異系數(shù)：<15%

　　注意事項(xiàng)

　　試劑盒有效期6個(gè)月，2-8℃保存

　　不同批號(hào)試劑不可混用

　　顯色液避光保存

　　洗滌不凈會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性

　　終止液含腐蝕性物質(zhì)，操作時(shí)需防護(hù)

　　所有廢棄物按生物危害物處理

　　所需儀器

　　酶標(biāo)儀(450nm濾光片)

　　精密移液器(0.5-1000μL)

　　37℃恒溫箱

　　洗板機(jī)(可選)

　　渦旋混合器

　　注：供科研使用，以上資料供參考，不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師是或品牌商。

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